Establishment of a Novel Host, High-Red Yeast That Stably Expresses Hamster NADPH-Cytochrome P450 Oxidoreductase: Usefulness for Examination of the Function of Mammalian Cytochrome P450
(ハムスターP450還元酵素を安定に発現する新規酵母株-High-red酵母-の開発:ほ乳類動物チトクロームP450の機能研究に対する有用性
Ohgiya,S./ Goda,T./ Hoshino,T./ Kamataki,T./ Ishizaki,K.
1997年7月 Archives of Biochemistry and Biophysics 343,215-224
ハムスターcDNAライブラリーからチトクロームP450還元酵素のcDNAをクローニングした。
単離したcDNAは2421bpで,667アミノ酸をコードしていた。
また,その推定N末端アミノ酸配列は,ハムスター肝臓から精製した酵素と基本的に一致した。
次に酵母トランスポゾンTyのデルタ因子をクローニングした。
ハムスターP450還元酵素発現ユニットをデルタ因子における相同組換えを利用して酵母染色体へ組み込んだ。
得られた形質転換体の中で最も高いP450還元酵素活性を示す形質転換体を選択し,High-red酵母と命名した。
High-red酵母には1本の染色体に6ヶ所以上のハムスターP450還元酵素発現ユニットが組み込まれており,それは100世代以上に渡って安定に保持されることがわかった。
High-red酵母内でマウスCYP1A1を発現させると,親酵母内でマウスCYP1A1を発現させたときよりもP450酵素活性が250倍に上昇した。